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小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(PAMPK)ELISA試劑盒

小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(PAMPK)ELISA試劑盒

簡要描述:小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(PAMPK)ELISA試劑盒
上海裕平生物科技有限公司主要經營Elisa試劑盒、實驗耗材、抗體、各種標本、細胞等生物化學試劑。還代理不同品牌價格檔次的ELISA試劑盒。價格實惠,質量好,靈敏度高。咨詢!

產品型號: 48T/96T

所屬分類:小鼠ELISA試劑盒

更新時間:2017-07-24

詳細說明:

小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(PAMPK)ELISA試劑盒

 小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA檢測試劑盒使用說明書
 

檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(PAMPK)ELISA試劑盒
樣品收集、處理及保存方法
1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱


操作注意事項
1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3.  標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白;預處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。
4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5.  所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱 96孔配置 48孔配置 備注
微孔酶標板 12孔×8條 12孔×4條 無
標準品(160ng/ml) 0.6mL  0.6mL  按說明書進行稀釋
標準品稀釋液 6mL 3mL 無
樣本稀釋液 6mL 3mL 無
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書進行稀釋
底物A 6mL 3mL 無
底物B 6mL 3mL 無
終止液 6mL 3mL 無
封板膜 2張 2張 無
說明書 1份 1份 無
自封袋 1個 1個 無
注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:160、80、40、20、10、5ng/ml
試劑的準備
 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1.  手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
2.  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步驟
1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;
4.  隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
結果判斷
 繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。
 
試劑盒性能
1.  準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900。
2.  靈敏度:zui低檢測濃度小于1.0ng/ml。
3.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4.  重復性:板內、板間變異系數均小于15%。
5.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
6.  有效期:6個月
免責聲明
1.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。
2.   嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。
 上海裕平生物科技有限公司專業銷售各種品牌檔次的ELISA試劑盒,*,售后服務完善。并可以免費代檢測。服務于高校及免疫學科研單位。技術人員更好的為您服務,歡迎垂詢。
公司展臺: http://www.yupingbio。。com



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