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人白介素1b(IL-1b)ELISA試劑盒

人白介素1b(IL-1b)ELISA試劑盒

簡要描述:人白介素1b(IL-1b)ELISA試劑盒
上海裕平生物科技有限公司代理各種品牌試劑盒,進口原裝\進口分裝抗體,生化試劑,原代細胞。各種標本、種屬、具體指標齊全,品種多,質量好,靈敏度高,詢價或在線咨詢。

產品型號: 48T/96T

所屬分類:人ELISA試劑盒

更新時間:2017-07-13

詳細說明:

人白介素1b(IL-1b)ELISA試劑盒
 

人白介素1bIL-1b)定量檢測試劑盒(ELISA

使用說明書

                                                                                                                            

人白介素1b(IL-1b)ELISA試劑盒
【試劑盒名稱】

人白介素1bIL-1b)定量檢測試劑盒(ELISA

 

【試劑盒用途】

定量檢測人血清、血漿及相關液體樣本中白介素1bIL-1b)的含量。

 


【檢測原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被人白介素1bIL-1b)抗體的透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分,再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中人白介素1bIL-1b)濃度呈正相關,450nm波長下測定OD值,根據標準品和樣品的OD值,計算樣本中人白介素1bIL-1b)含量。

 


【試劑盒組成】

 

1

酶標包被板

12×8

7

顯色劑A

6mL

2

標準品:240pg/mL

0.6mL

8

顯色劑B

6mL

3

20倍濃縮洗滌液

25mL

9

終止液

6mL

4

標準品稀釋液

6mL

10

說明書

1

5

樣本稀釋液

6mL

11

封板膜

2

6

酶標試劑

6mL

12

密封袋

1

備注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:240、120、60、30、15、7.5pg/mL

 

【需要而未提供的試劑和器材】

1、37恒溫箱

2、標準規格酶標儀

3、精密移液器及一次性吸頭

4、蒸餾水

5、一次性試管

6、吸水紙

 

【操作步驟】

1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。

2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3、加標準品和待測樣本:取足夠數量的酶標包被板,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。

4、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。

7、溫育:重復4的操作。

8、洗板:重復5的操作。

9、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μL,再加入顯色劑B 50μL,37避光顯色15min。

10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(顏色由藍色立轉黃色)。

11、測定:以空白孔調零,在終止后15分鐘內,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。

12、計算:根據標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。

 

【樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3,因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。

2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于-20保存,但應避免反復凍融。

3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒。

 

【注意事項】

1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

2、酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。

4、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。

5、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜。

6、試劑盒保質期內使用,不同批號的試劑不得混用。

7、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

【操作程序總結】

 

準備試劑,樣品和標準品

 


 

加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘

 

洗板4次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘

 

洗板4次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘

 

加入終止液

 

15分鐘之內讀OD值

 

計算

 

【檢測范圍】

7.5-240pg/mL

【規格】

96人份/盒

【貯藏】

2-8℃,避光防潮保存。

【有效期】

6個月

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